1.开机
打开计算机,蛋白纯化仪,此时蛋白纯化仪会自检,当蛋白纯化仪上所有指示灯不亮时,才可进行操作。双击桌面上的UNICORN图标,进入操作界面,UNICORN的操作界面分为四个窗口。
2.准备工作溶液和样品
所有工作溶液和样品必须经0.45um的滤膜过滤,样品也可高速离心后取上清备用。当缓冲溶液中含有有机溶剂(如乙腈、甲醇),需在使用前用低频超声脱气10min。
3.清洗及管道准备
首先将A泵和B泵的进液管道分别放入水中,在system control 窗口点击工具栏内的manual ,选择pump, pump wash basic,选中A管道为ON,execute,A泵清洗完点击end,按同样的操作再清洗B泵。
4.安装层析柱
A泵和B泵分别放入水中,在file文件夹中找到要运行的程序,执行程序。待管道流出水后接入柱子柱头,稍拧紧后将柱子下端的堵头卸掉接入管道连上紫外流动池。先用水平衡柱子。注意安装层析柱时输入较低的流速,以防超过层析柱的耐受压力,另外,在仪器运行程序的时候安装层析柱,以防层析柱进入气泡,损坏层析柱。
5.开始纯化
将A泵和B泵放入buffer中,分别清洗A泵和B泵,再用buffer A 平衡层析柱。在柱子平衡好后,就可以上样了。上样结束后,运行洗脱收集程序。
6.清洗泵及卸下层析柱
将A泵和B泵放入纯水中,启动pump wash basic 功能清洗A泵和B泵及整个管路,然后再将A泵和B泵放入20%的乙醇中,同样操作将乙醇充满整个管路保存。然后卸下层析柱将柱子堵头堵上。
7.关闭电源
从软件控制系统的第一个窗口 unicorn manager 点击退出,其它窗口不能单独关闭。然后关闭AKTA 主机电源,关闭电脑电源。